Сверхчистая вода как компонент мультипараметрических методов измерений

Сверхчистая вода как компонент мультипараметрических методов измерений

Сверхчистая вода используется в биотехнологии для решения таких задач молекулярной и клеточной биологии, как, например, постановка полимеразной цепной реакции (ПЦР). Кроме того, сверхчистая вода применяется в качестве компонента мультипараметрических цитологических анализов. Эти анализы, которые называются EXTassays и используются в исследованиях биологически активных веществ, основываются на генетических сенсорах, отбираемых молекулярными репортерами со штрихкодом и позволяющих выполнять всеобъемлющий анализ внутриклеточных сигналов. Эти специфические анализы комбинируются с технологией высокопроизводительного секвенирования «Секвенирование нового поколения» (СНП), благодаря чему в процессе одного измерения можно получить обширные наборы данных. Сверхчистая вода может без проблем использоваться в молекулярно-биологических работах, требующих высокого качества воды.

В биомедицинских фундаментальных исследованиях биологически активных веществ, в том числе важных с точки зрения фармацевтики, все чаще эксперименты на клетках комбинируют с мультипараметрическими методами измерений для того, чтобы получить возможность еще глубже изучить чрезвычайно сложные процессы протекания заболеваний и воздействия веществ. Эти методы включают в себя методы молекулярной и клеточной биологии, которым в качестве основы требуется сверхчистая вода, как, например, при полимеразной цепной реакции или культивировании клеток.

При исследованиях на клетках определяют внутриклеточные процессы до или после добавления вещества, при этом устанавливают главным образом относительные изменения определенных классов молекул [в том числе информационной РНК (иРНК), микроРНК, протеинов]. Непосредственный анализ действия и функции молекул, важных с биологической точки зрения, например, у веществ с химико-медицинским механизмом действия и антител, на предмет определенных внутриклеточных процессов может быть проведен только при очень высоких материальных затратах и чрезвычайно высокой чистоте используемых растворов (в том числе воды). Поэтому мультипараметрические методы измерений все чаще выступают на передний план.

Мультипараметрические методы измерений позволяют выполнять одновременный анализ реакции большого количества внутриклеточных целевых молекул (так называемых молекул-мишеней) на введение биологически активных веществ и благодаря этому составить профиль их действия на клеточном уровне. Такие всеобъемлющие и трудоемкие анализы необходимы, в частности, чтобы подтвердить желаемое медицинское действие и определить нежелательные побочные эффекты. Они имеют значение также и для освоения новых областей применения уже разрешенных медикаментов. Кроме того, получение в результате мультипараметрического метода измерений большого количества данных сочетается с огромными преимуществами в отношении затрат, которые могут быть реализованы на практике, например, с помощью технологии EXTassay.

Эта технология основывается на молекулярных репортерах со штрихкодом и позволяет применить принципиально новые и проводимые в высокой степени параллельно измерения (EXT означает Expressed Sequence Tag = маркер экспрессируемой последовательности; EXT – это короткие синтетические молекулы РНК со специфически кодированной последовательностью длиной 49 пар нуклеотидов). Так, эта технология позволяет получить несколько миллионов точек данных за одно измерение, поскольку отдельные внутриклеточные события, связанные с молекулярными штрихкодами, могут быть проанализированы с помощью секвенирования (А).

Анализы, схема

  • А) Специфические анализы позволяют одновременно исследовать различные виды деятельности клеток в процессе одного измерения. В отличие от классических анализов с использованием генов-репортеров в результате специфических анализов получают более 10 миллионов точек данных за один эксперимент.
  • В) Анализы отображают специфичность и профиль воздействия веществ на клетки. Профили действия различных молекул-мишеней в количестве Х в ходе одного измерения одновременно регистрируются при различных условиях в количестве Y

Классический анализ по репортеру позволяет измерять только одну или две точки данных за один сеанс, в связи с чем для получения многих точек данных используют автоматику. В противоположность этому специфическая система анализа основана на репортерных молекулах, так называемых EXT-репортерах или EXT-штрихкодах, несущих в себе адреса молекул и тем самым позволяющих сделать заключение о месте и времени их экспрессии. С помощью этих штрихкодов можно одновременно идентифицировать и функционально отобразить многие различные внутриклеточные процессы, например, активирование рецепторов и другие следующие за этим клеточные сигналы (В).

При таком мультипараметрическом анализе в качестве системы отбора для функционального и количественного анализа различных внутриклеточных процессов используется технология высокопроизводительного секвенирования (СНП). Первоначально технология СНП применялась для секвенирования геномов.

Бурное развитие этой технологии привело к тому, что ее стали применять и в целях медицины, в частности для терапевтической диагностики и идентификации рисков генетических заболеваний. Применения сверхчистой воды, полученной с помощью системы arium® pro VF (Sartorius) возможно на различных стадиях этого многоуровневого метода.

Arium

В различных процедурах одного эксперимента со специфическими репортерами сверхчистая вода играет решающую роль: так, например, стерилизованную в автоклаве сверхчистую воду используют для увлажнения термостата для клеточных культур, чтобы обеспечить стерильное инкубирование клеток без микроорганизмов и спор. Для определения молекулярно-биологических параметров (например, концентрации ДНК и РНК) также применяется сверхчистая вода.

Помимо этого, сверхчистая вода используется при подготовке проб к СНП, то есть при очистке EXT-репортеров с помощью комплекта для изоляции РНК, при записи к ДНК, а также при дальнейших шагах ПЦР, необходимых для амплификации репортерного материала для высокопроизводительного секвенирования. Сверхчистая вода применяется также в заключительных процедурах СНП.

Для получения дополнительной информации о решениях Sartorius для получения сверхчистой воды просьба обращаться к специалистам официального дистрибьютора Компании на территории РФ по телефону +74952520098 или электронной почте info@phct.ru.

Высокоточная измерительная техника A&D по выгодным ценам! Высокоточная измерительная техника A&D по выгодным ценам! Компания A&D спешит сообщить своим заказчикам о старте акции на высокоточную измерительную технику A&D.

Флагманская модель ViBRA серии ALE доступна со склада! Флагманская модель ViBRA серии ALE доступна со склада! Серия ALE - новое слово в оптимизации процессов лабораторного взвешивания. Получить дополнительную информацию о весах ViBRA серии ALE можно у специалистов официального дистрибьютора компании на территории РФ.

Новинки для упаковки продукта в блистеры от компании O.M.A.R. Новинки для упаковки продукта в блистеры от компании O.M.A.R. В этом году компания O.M.A.R. продемонстрировала ряд новинок на международной выставке в Германии ACHEMA: блистерную машину для R&D-лабораторий Fantasy Plus, блистерную машину для упаковки в стрип-пакеты BF 35, блистерную машину BF 50 Plus и деблистерную машину F140. Машины изготавливались с применением ряда серьезных технологических усовершенствований, чтобы клиенты компании O.M.A.R. могли использовать весь потенциал современных научно-исследовательских и опытно-конструкторских разработок.

Особенности культивирования клеток насекомых Sf9 в шейкерах-инкубаторах Особенности культивирования клеток насекомых Sf9 в шейкерах-инкубаторах Клетки насекомых Sf9 представляют собой клонов клеточной линии Sf21, полученной из ткани яичек мотылька Spodoptera frugiperda. Роль клеток Sf9 в получении рекомбинационного белка становится все более значимой, в особенности в сочетании с Экспрессирующей Бакуловирусной Векторной Системой (ЭБВС). Рост клеток Sf9 можно ускорить путем увеличения концентрации глюкозы, поэтому в данном случае рекомендуется применять культивирование с подпиткой.

Революция в мире пробоотбора Революция в мире пробоотбора Как известно, потребности рождают изобретения. Сотрудники лабораторий в сфере life science, в частности, тратят значительное количество времени на отбор проб, что, несомненно, требует применения более эффективных приборов. Ориентируясь на потребности пользователей в данной нише, компания INTEGRA разрабатывает инновационные решения, опираясь на потребности и боли своих заказчиков. Благодаря тесному взаимодействию с пользователями своего оборудования специалисты компании INTEGRA создают действительно инновационные продукты, которые год за годом становятся все более удобными и повышают эффективность работы в лаборатории.

Новая разработка компании SYSTAG – контроль теплового эффекта реакции в режиме реального времени Новая разработка компании SYSTAG – контроль теплового эффекта реакции в режиме реального времени CaloX инновационная технология, призванная повысить эффективность процессов разработки. Онлайн калориметр для измерения интенсивности теплового потока CaloX элементарно интегрируется с ПО FlexySys, не требует калибровки после установки, гарантирует быстрое время отклика и точность результатов вне зависимости от уровня наполнения реактора.