Оценка подлинности клеточных линий с помощью RTCA-профилирования для экспертизы качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человека

Введение. Одним из важных показателей качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, определяемых в рамках экспертизы качества, является подлинность. Характеристика подлинности включает в том числе определение пролиферативной активности клеточной линии, входящей в состав таких препаратов. Для оценки пролиферативной активности клеток может быть использован прибор xCELLigence RTCA DP (Agilent Technologies, США), который представляет собой клеточный анализатор в режиме реального времени (RTCA), позволяющий проводить непрерывный анализ in vitro без использования меток.

Цель. Показать воспроизводимость методики RTCA-профилирования в качестве метода первичной оценки подлинности клеточных линий.

Материалы и методы. Получали RTCA-профили клеточных линий дермальных фибробластов DF-2 и мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани МСК ЖТ_D122 с помощью клеточного анализатора xCELLigence RTCA DP (Agilent Technologies, США). Эксперимент проводили после размораживания трех разных флаконов одной партии каждой клеточной линии в трех повторах.

Результаты и обсуждение. Получены RTCA-профили для клеточных линий DF-2 и МСК ЖТ_D122. Статистическая обработка результатов анализа проведена при использовании критерия Фридмана, доверительных интервалов и параметров кривых роста, полученных с помощью прибора (время удвоения, скорость пролиферации и максимальный клеточный индекс). На основании полученных данных было показано отсутствие различий RTCA-профилей для каждой клеточной линии при параллельном взятии материала из трех флаконов.

Заключение. Обоснована и показана воспроизводимость методики RTCA-профилирования для оценки применимости клеточного анализатора при подтверждении подлинности клеточных линий.

1. Xi B., Yu N., Wang X., Xu X., Abassi Y. A. The application of cell-based label-free technology in drug discovery. Biotechnology Journal: Healthcare Nutrition Technology. 2008;3(4):484–495. DOI: 10.1002/biot.200800020.

2. Langenbach K. ATCC technology assessment of Roche xCELLigence System: an electronic impedance-based cell sensing unit. BioTechniques. 2010;49(6):905–906. DOI: 10.2144/000113575.

3. Hillger J. M., Lieuw W. L., Heitman L. H., IJzerman A. P. Label-free technology and patient cells: from early drug development to precision medicine. Drug discovery today. 2017;22(12):1808–1815. DOI: 10.1016/j.drudis.2017.07.015.

4. Irelan J. T., Wu M.-J., Morgan J., Ke N., Xi B., Wang X., Xu X., Abassi Y. A. Rapid and quantitative assessment of cell quality, identity, and functionality for cell-based assays using real-time cellular analysis. Journal of biomolecular screening. 2011;16(3):313–322. DOI: 10.1177/1087057110397359.

5. Guimet D., Jin C., Abassi Y. A. Real-Time Quality Control and Functional Assessment of Mesenchymal Stem Cells for Cellular Therapies. Santa Clara: Agilent Technologies, Inc.; 2019. Available at: https://www.agilent.com/cs/library/applications/application-mesenchymal-stem-cells-xcelligence-5994-1067en-agilent.pdf.

6. Петручук Е. М., Шалунова Н. В., Олефир Ю. В., Борисевич И. В., Перекрест В. В., Шевцов В. А., Рукавишников А. В., Хантимирова Л. М. Культуры клеток в заместительной терапии. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2017;17(4):197–206.

7. Мельникова Е. В., Меркулова О. В., Борисевич И. В., Меркулов В. А. От клеточных технологий к биомедицинским клеточным продуктам: опыт использования препаратов на основе жизнеспособных клеток человека в Российской Федерации. Цитология. 2018;60(4):231–240. DOI: 10.31116/tsitol.2018.04.01.

8. Крылова Т. А., Мусорина А. С., Зенин В. В., Кольцова А. М., Кропачева И. В., Турилова В. И., Яковлева Т. К., Полянская Г. Г. Получение и характеристика неиммортализованных клеточных линий дермальных фибробластов человека, выделенных из кожи век взрослых доноров разного возраста. Цитология. 2016;58(11):850–864.