Разработка и валидация методики определения инновационного препарата DD217 – ингибитора фактора Xa в плазме крови крыс с целью проведения фармакокинетического исследования

Введение. В настоящее время актуальной задачей для фармацевтической науки является поиск и разработка инновационных препаратов. Одним из таких является N-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4 [этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида гидрохлорид (далее – DD217) – инновационный препарат, относящийся к классу антикоагулянтов, ингибиторов фактора Xa.

Цель. Целью настоящего исследования явилась разработка и валидация методики определения DD217 в плазме крови крыс методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС) и применение разработанной методики для проведения фармакокинетических исследований.

Материалы и методы. В исследовании были использованы аутбредные крысы Wistar. Крысам вводили раствор субстанции DD217 однократно, внутрижелудочно в дозах 5, 15, 30 мг/кг. Для определения DD217 в плазме крови крыс применяли валидированную методику определения DD217 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). В качестве внутреннего стандарта был выбран небиволол. Хроматографическое разделение проводилось с использованием колонки Phenomenex Luna С8 (3 мкм, 50 × 4,6 мм). В качестве подвижной фазы использовали 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в деионизованной воде и 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле. Общее время анализа каждого образца составляло 2,0 мин. DD217 и небиволол детектировали в режиме положительной ионизации электроспреем по ионным переходам m/z 436,1 → 119,9 и 406,0 → 151,0 соответственно. Фармакокинетические параметры и описательную статистику рассчитывали модельно-независимым методом при помощи программного обеспечения IBM SPSS Statistics v27 и Julia v1.6.0 (Mixed Models v3.8.0, ClinicalTrialUtilities v0.5.1).

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим показателям: нижний предел количественного определения, селективность, правильность и прецизионность, допустимость разведения, линейность, эффект матрицы, степень извлечения, эффект переноса и стабильность. Нижний предел количественного определения DD217 в плазме крови крыс составил 2,0 нг/мл. Разработанная методика была успешно применена для определения фармакокинетических параметров субстанции DD217 в плазме крови крыс после внутрижелудочного введения в дозах 5, 15, 30 мг/кг.

Заключение. Методика для количественного определения DD217 в плазме крови впервые разработана, валидирована и применена для оценки фармакокинетических параметров субстанции DD217 в плазме крови крыс.

1. Glushchenko V. A., Irklienko E. K. Cardiovascular morbidity is one of the most important public health problems. Medicine and Health Organization. 2019;4(1):56–63. (In Russ.)

2. Mensah G. A., Roth G. A., Fuster V. The Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors: 2020 and Beyond. J Am Coll Cardiol. 2019;74(20):2529–2532. DOI: 10.1016/J.JACC.2019.10.009.

3. Weitz J. I., Harenberg J. New developments in anticoagulants: Past, present and future. Thrombosis and Haemostasis. 2017;28;117(7):1283–1288. DOI: 10.1160/TH16-10-0807.

4. McGrath E. R., Go A. S., Chang Y., Borowsky L. H., Fang M. C., Reynolds K., Singer D. E. Use of Oral Anticoagulant Therapy in Older Adults with Atrial Fibrillation After Acute Ischemic Stroke. Journal of the American Geriatrics Society. 2017;65(2):241–248. DOI: 10.1111/jgs.14688.

5. Di Minno A., Frigerio B., Spadarella G., Ravani A., Sansaro D., Amato M., Baldassarre D. Old and new oral anticoagulants: Food, herbal medicines and drug interactions. Blood Reviews. 2017;31(4):193–203. DOI: 10.1016/j.blre.2017.02.001

6. Marzec L. N., Wang J., Shah N. D., Chan P. S., Ting H. H., Gosch K. L., Hsu J. C., Maddox T. M. Influence of Direct Oral Anticoagulants on Rates of Oral Anticoagulation for Atrial Fibrillation. Journal of the American College of Cardiology. 2017;69(20):2475–2484. DOI: 10.1016/j.jacc.2017.03.540.

7. Lippi G., Gosselin R., Favaloro E. J. Current and Emerging Direct Oral Anticoagulants: State-of-the-Art. Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 2019;45(05):490–501. DOI: 10.1055/s-0039-1692703.

8. Shimada K., Hasegawa S., Nakao S., Mukai R., Sasaoka S., Ueda N., Kato Y., Abe J., Mori T., Yoshimura T., Kinosada Y., Nakamura M. Adverse reaction profiles of hemorrhagic adverse reactions caused by direct oral anticoagulants analyzed using the Food and Drug Administration Adverse Event Reporting System (FAERS) database and the Japanese Adverse Drug Event Report (JADER) database. Int J Med Sci. 2019;16(9):1295–1303. DOI: 10.7150/ijms.34629

9. de Candia M., Lopopolo G., Altomare C. Novel factor Xa inhibitors: A patent review. Expert Opin Ther Pat. 2009;19(11):1535–1580. DOI: 10.1517/13543770903270532.

10. Kozieł M., Lip G. Y. H. Estimating individual lifetime benefit and bleeding risk of adding oral anticoagulation to aspirin for patients with stable cardiovascular disease: directions from COMPASS? European Heart Journal. 2019;7;40(46):3779–3781. DOI: 10.1093/eurheartj/ehz517.

11. Vranckx P., Valgimigli M., Heidbuchel H. The significance of drugdrug and drug-food interactions of oral anticoagulation. Arrhythmia Electrophysiol Rev. 2018;7:55–61. DOI: 10.15420/aer.2017.50.1.

12. Tarasov D. N., Tovbin D. G., Malakhov D. V., Aybush A. V., Tserkovnikova N. A., Savelyeva M. I., Savchenko A. Y. The Development of New Factor Xa Inhibitors Based on Amide Synthesis. Current Drug Discovery Technologies. 2018;15(4):335–350. DOI: 10.2174/1570163815666180215114732.

13. Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of the European Union / Luxembourg: Publications Office of the European Union. 2010;53:33–79.